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第20章 动物实验的基本操作(1)

一、实验动物的捉持方法

为了避免动物受到伤害,掌握捉拿动物的正确方法至关重要。

1.小鼠

捉持小鼠时,用右手提起鼠尾使动物放在鼠笼或粗糙物上面,借助动物往前爬的力量,用左手拇指和食指捏住其头颈部的皮肤和双耳,固定在手掌中,使其腹部朝上,以无名指和小指夹住鼠尾即可。也可使用单手提持,用左手的食指和拇指抓住小鼠尾巴,然后用小指、无名指和手掌压住鼠尾根部,再用拇指和食指捏住其双耳及头颈部皮肤,使其腹部朝上即可。

2.大鼠

大鼠的攻击性较强易伤人,捉持时应先戴上手套。右手捏住大鼠尾巴放在鼠笼或粗糙物上面,并提起鼠尾,用左手捏住其头部、背部皮肤,使之固定。也可张开左手用拇指和手掌。分别从动物的背部绕到左右前肢腋下拿起大鼠,握住整个身体,但用力应适当,以免窒息死亡。

3.家兔

实验家兔多数饲养在笼内,所以抓取较为方便,一般以右手抓住兔颈部的毛皮提起,然后用左手托其臀部,让其体重的大部分集中在左手上,这样避免了抓取过程中的动物损伤。(忌抓双耳或抓提背部,以免损伤双耳和两肾)。

4.豚鼠

豚鼠较为胆小易惊吓,不宜强烈刺激,所以在攥取时,必须稳、准和迅速,一般抓取方法是:用左手的拇指和手掌从背部绕到腋下,另一只手托住臀部即可。

5.猫

捉拿猫时,为防止抓伤应戴手套。用猫头夹夹住其颈部,抓住四肢并固定在手术台上。或将其放入布袋中,将猫挤到布袋角落按住猫头和身体使之固定。

6.狗

狗较凶猛,为防止咬伤,需用一特制的狗头固定器。操作时先将狗舌拉出,把狗插人固定器的铁圈内,再用平直铁闩横贯于犬齿后部的上下颌之间,然后向下旋转棒螺丝。使弓形铁逐渐下压在狗的下颌骨上,把铁柄固定在实验台的铁柱上即可。绑好四肢后,方可进行实验。

7.鸽子

一只手从鸽的前方,另一只手绕到鸽的背后悄悄接近,两只手迅速将鸽捕住,捕住后把鸽朝向持者方向,以右手食指和中指夹住鸽的双脚,以左手掌紧握从腹部到翼部的位置。

二、实验动物的编号

在药理实验中为了辨别、观察并记录每只动物的变化情况,常在实验前进行随机分组并编号标记。标记方法很多。常用的标记方法有染色法、挂牌法和烙印法。动物不同标记方法也不一样,如较大动物猴、狗、猪、兔和猫等可挂用金属牌,牌上标明编号,也可在其背或耳上烙印编号。大鼠和小鼠的编号一般都采用各种不同颜料涂擦被毛的方法来标记,也可在其尾部用不同颜色的油性记号笔来标记。

颜料涂染最常使用,常用的涂染化学品有:涂染黄色,用3%~5%2,4,6-三硝基苯酚(苦味酸)溶液;涂染红色,用0.5%中性红或品红溶液;涂染咖啡色,用2%硝酸银溶液;涂染黑色,用煤焦油的乙醇溶液。

标记时用毛笔或棉签蘸取上述溶液,在动物体的不同部位涂上斑点,以示不同号码。编号的原则是:先左后右,从上到下。一般习惯涂染在左前腿上为1,左侧腰部为2,左后腿上为3,头部为4,背部正中为5,尾基部为6,右前腿为7,右侧腰部为8,右侧后腿上为9,不涂染鼠为10。

如果实验时动物的编号超过10,且在20~99之内,可采用在上述动物同一部位上,再涂染另一种涂染剂斑点,表示相应的十位数。标记要有记录,以免时间长忘记。

三、实验动物的给药方法

1.小鼠和大鼠的给药方法

(1)灌胃给药左手将小鼠或大鼠固定后,右手持装有灌胃针头(小鼠用9号注射针头。大鼠用静脉针头或小号腰穿针头磨钝制成)的注射器,自口角插入口腔,用灌胃管压其头部,使口腔与食管成一直线,再将灌胃管沿上颚壁轻插入食管。如动物安静,呼吸无异常,可将药液推人,如遇阻力,应将针管退出后再插,以免穿破食管或误入气管导致动物死亡。

(2)皮下注射一般两人合作,一人右手拉住鼠尾,左手抓住鼠头部皮肤,一人左手提起背部皮肤,右手持连有5号针头注射器将药液注入提起的皮下。小鼠皮下注射也可一人操作,左手小指和手掌夹住鼠尾,拇指和食指提起背部皮肤,右手持注射器注入皮下给药。

(3)腹腔注射左手固定动物,腹部朝上,并将其左后肢用小指和无名指固定,右手持注射器从左下腹向头部方向以45度角刺入腹腔,注入药液。注意针头刺入部位不宜太深太高,以免刺破内脏。

(4)肌内注射捉持动物方法同上,将药液注入后腿上部外侧肌肉内。

(5)静脉注射一般多用尾静脉,先将小鼠或大鼠装入固定筒内或扣住的乳钵、烧杯内,使其尾露出,尾部用45。温水浸泡半分钟或用75%乙醇涂擦,使血管扩张,以拇指和食指捏住尾尖部,用4又1/2号针头选其粗大静脉左右两侧注射。大鼠除尾静脉注射外,尚可在麻醉下切开皮肤于股静脉内,还可作舌下静脉注射。

2.家兔

(1)耳缘静脉注射先选定耳缘静脉(耳背内侧),拔除局部的毛,用酒精棉球涂擦,或用食指轻弹耳廓,使血管扩张。用左手食指和中指夹住耳根部,拇指和无名指夹住耳尖部拉直,右手持注射器连5号针头刺入血管,再用拇指和食指固定针头处,将药液推入。若推注顺利无阻力,表示药液在血管内,否则应拔出重新注射。注射完毕后用手指或棉球轻压针眼处,以防出血。注射量一般为0.5~10ml/kg。

(2)眼结合膜内给药将兔置于固定箱内,左手拇指和食指拉开兔下眼睑呈杯状,中指压住眼内眦,滴入药液1~2滴,然后合拢眼睑,使眼球充分接触药液,约1min后再松手。

(3)灌胃二人合作,一人坐位将兔夹在两腿中间,左手紧握双耳,固定头部,右手抓住两前肢,另一人将木制开口器横放于兔口中,压在舌头上面,取8号导尿管由开口器中部小孔插入食管约15cm。为避免误入气管,可将导尿管外口浸入水中,不见气泡表示插入胃中,然后注入药液。

(4)腹腔、肌内及皮下注射基本同小鼠。

3.豚鼠

(1)皮下、肌内及腹腔注射方法同小鼠,给药量稍大。

(2)静脉注射可选用后脚掌外侧静脉,外颈静脉或股静脉(需切开注射)。作后脚掌外侧静脉注射时,由一人捉豚鼠并固定一条后腿,另一人剪去注射部位的毛,用酒精棉球涂擦局部皮肤,可用连接在注射器上的小儿头皮静脉输液针头刺入血管。外颈静脉注射时需先将颈部皮肤剪以小口,使血管暴露,再用针头刺入血管。

(3)灌胃方法同家兔。

4.猫和犬

(1)灌胃给药猫的灌胃方法同家兔。犬灌胃时将头固定好,嘴用纱带绑住,取导尿管或软胶皮管(内径0.3cm,长30cm)用温水湿润后从口腔插入食管约20cm,即可用注射器推入药液。

(2)皮下及肌内注射皮下注射多在大腿外侧,肌内注射可在臀部,一般用6又1/2号针头。

(3)静脉注射猫多选用前肢皮下静脉,犬多选用后肢小隐静脉。也可注射于颈静脉,麻醉后可由舌下静脉给药。

5.鸽子

(1)灌胃可用钳子把鸽嘴撬开,将胃管插入食管给药。也可把鸽头保持水平位,向嘴中一滴滴投入药液,勿使进入气管内,鸽可活动上下嘴而咽下。

(2)皮下注射可在翼下部位,肌内注射注入胸肌或腓肠肌,静脉注射取翼下静脉。

四、实验动物被毛的去除方法

动物的被毛常能影响实验操作和结果观察,故需去除或剪短动物的被毛。除毛的方法有三种:剪毛、拔毛、脱毛。

1.剪毛

动物固定后,用粗大剪刀剪去所需部位的被毛,多用于对无菌条件要求不十分严格的手术前,或犬等动物静脉注射之前。

剪毛时要把剪刀贴近皮肤,不可用手提起被毛,以免剪破皮肤。

2.拔毛

给兔耳缘静脉注射或取血时需用拇指,食指将局部被毛拔去,以便于操作。

3.脱毛

系指用化学药品脱去动物的被毛。

操作时要先剪短被毛,再用棉球蘸脱毛剂,在所需局部涂一薄层,2~3min后用温水洗去脱落的被毛,以纱布擦干局部,涂一层油脂即可。多用于无菌手术液的制备、观察动物局部皮肤血液循环和病理变化以及贴剂等皮肤给药。

适用于家兔、大鼠和小鼠等小动物脱毛的脱毛剂配方一般有以下几种。

(1)硫化钠3g,肥皂粉1g,淀粉7g,加水适量调成糊状。

(2)硫化钠8g,淀粉7g,糖4g,甘油5g,硼砂1g,加水75ml。

(3)硫化钠8g,溶于100ml水中。

适用于狗等大动物脱毛的配方:硫化钠10g,生石灰15g,溶于100ml水中。

五、实验动物的采血方式

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