不同配方的母种培养基的配制方法大同小异，基本与PDA培养 基的制作相似，现以PDA培养基的配制方法为例介绍如下。
（1）制作方法：选择新鲜、无病虫害、无烂斑的优质食用马 铃薯，洗净去皮，有发芽的要挖净芽眼并削去青皮，切成薄 片，称取200克，加水1000毫升，煮沸后小火保持沸腾20～30 分钟，以薯块酥而不烂为度。趁热用6层纱布过滤取其滤液。 若滤液不足1000毫升，则加水补足。然后将浸水后的琼脂加 入马铃薯滤液中，继续用文火加热至全部溶化为止。加热过 程中要用筷子不断搅拌，以防溢出和烧焦。然后加入葡萄糖 补足水分到1000毫升搅拌均匀溶化后，趁热装入试管或三角 瓶备用。
（2）定容与调节pH值。制好的液量如不足1000毫升可加水补 足。当加入的化学药品全部溶化后，用pH试纸检测其pH值， 一般pH值应为7，如高于7，可用酸性调节剂食醋或0.1％～ 0.2％的柠檬酸调低至7；如低于7则用碱性调节剂0.1 %～ 0.2%的氢氧化钠或1％的碳酸钠或碳酸氢钠调高至7。
（3）分装试管。将配制好的培养基趁热（60℃）倒入事先准 备好的量杯中，用玻璃漏斗和汤匙分装入试管。试管常用的 规格是高度为18～20厘米，口径为18～20毫米，分装试管的 设备可用带铁环的铁架。
培养基过凉时，琼脂逐渐凝固，不易流出，故要趁热分装。 分装时，小心操作，试管要直立，培养液不可沾于试管口内 壁上，以防日后长出杂菌，一旦不慎试管口附近沾上了培养 基，待凝固后用接种钩取出，并用潮湿的纱布擦拭干净。每 支试管的培养基分装量以至试管下部的1／5～1／4高处为宜 。
（4）塞棉塞。用一定干净的、新的棉花制作棉塞，不可用旧 棉絮代替，也不宜用医用脱脂棉。将棉花做成较坚实，上下 粗细均匀的棉塞，塞入试管内约2厘米，外留1厘米长，以不 松不紧为度，其作用是既能通气，又能防止杂菌侵入。塞时 不能将棉塞旋转塞入，以防止留下螺旋状缝隙，使杂菌由此 进入。然后取5～10支试管为一束，用聚丙烯塑料薄膜或牛皮 纸或硫酸纸包装好试管上头，用皮筋或细线扎住，防止棉花 塞受潮之后杂菌侵入。
（5）高压灭菌。母种培养基的灭菌，要使用高压锅，不能使 用常温常压锅灶，以免灭菌时间过长，培养基营养成分受到 破坏，不利于菌丝生长。
高压灭菌时，试管要直立摆放。在压力达到0.11兆帕、温度 121℃状态下保持30分钟。停止加热，待压力表自然降到零后 取出试管。
（6）斜摆试管。取出的试管冷却至60℃以前，放在斜面架上 或一根木条上，摆成斜面。培养基斜面应占试管的1／3～1／ 2，切勿使斜面过长接近棉塞，以防污染，待完全凝固后，收 好备用。
（7）无菌测定。斜面培养基灭菌后，应进行无菌测定，确定 无菌后，方可使用。初次进行接种的工作者尤其应做此项测 定，以免灭菌有误造成制种失败。测定方法是：随机或全部 取出试管，放于28℃的恒温箱中（夏天室内也可）空白培养6 ～7天后，如斜面干净依旧，没有任何杂菌生长现象，即可使 用。如果斜面上有杂菌生长，则须延长培养基灭菌时间，经 再次试验确定灭菌时间。如图8所示。
图8配制试管斜面培养基
1.分装2.塞棉塞3.包扎成束4.高压灭菌5.摆斜面
