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第9章 结缔组织(2)

1%酸性品红水溶液 5毫升

苦味酸饱和水溶液95毫升

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)Welgert氏苏木素工作液染10分钟;

(3)蒸馏水冲洗切片;

(4)Van Gieson液染1~3分钟;

(5)95%酒精、100%酒精脱水,二甲苯透明,各2次,每次2分钟;

(6)中性树脂封固。

5.结果

胶原红色

肌肉黄色

角化上皮黄色

核黑色

六、Manuel氏网状组织染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,6微米。

3.溶液

1%硝酸铀溶液 (见第15章)

氨银溶液

硝酸银100克

蒸馏水1000毫升

彻底混匀,去掉10%硝酸银溶液上层70毫升置于旁边,在剩余的930毫升10%硝酸银溶液中加

28%氢氯化铵60毫升

慢慢地把保留的70毫升硝酸银溶液中的50毫升加入。剩下的20毫升逐渐加入直到反应液轻微混浊即停止再加。此液可在冰箱中贮存几个月。

1%福尔马林溶液

5%硫代硫酸钠溶液

核固红溶液

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)在硝酸铀溶液中增敏2分钟;

(3)流水快速浸泡;

(4)氨银溶液中浸染1分钟;

(5)流水冲洗,2~3次快速浸泡,直到不再有白色沉淀出现;

(6)福尔马林溶液中固定1分钟;

(7)流水冲洗;

(8)氯化金溶液调色1分钟;

(9)流水冲洗;

(10)硫代硫酸钠溶液还原1分钟;

(11)流水冲洗;

(12)核固红溶液复染5分钟;

(13)蒸馏水洗3次;

(14)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,各2次,每次2分钟;

(15)中性树脂封固。

5.结果:

网状纤维 黑色

核及背景 红色

七、Snook氏网状纤维染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,6微米。

3.试剂

0.25%高锰酸钾溶液

5%草酸

1%硝酸铀溶液

5%硝酸银溶液

10%氢氧化钠溶液

Snook氏氨银溶液

5%硝酸银溶液20毫升

加入

10%氢氯化钠 20滴

振荡同时加浓氨氧化铵溶液,逐滴加入至溶液变澄清及在量筒的底部残留少许颗粒时为止。过滤后立即使用。

1%福尔马林溶液

1%氯化金溶液

5%硫代硫酸钠溶液

核固红溶液

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)高锰酸钾溶液中氧化5分钟;

(3)自来水冲洗;

(4)置于草酸溶液至切片变干净;

(5)自来水冲洗,然后置于蒸馏水中;

(6)硝酸铀染5分钟;

(7)流水冲洗;

(8)氨银溶液中1分钟;

(9)流水漂洗;

(10)l%福尔马林溶液1分钟;

(11)流水冲洗;

(12)置于1%氯化银溶液中至切片变为灰黑色,1分钟;

(13)流水冲洗;

(14)硫代硫酸钠溶液30秒到1分钟;

(15)流水冲洗;

(16)核固红溶液复染5分钟;

(17)蒸馏水洗;

(18)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,各2次,每次2分钟;

(19)中性树脂封固。

5.结果

网状纤维 灰到黑色

背景 粉红到玫瑰色

6.注意事项

(1)每10~12张切片更换一次溶液。

(2)8到18步应该用酸洗过的染缸,每步均用被石蜡覆盖的镊子或Teflon镊子夹持。8~18步,每步每次只处理一张切片。

八、Wilder氏网状纤维染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,6微米。

3.溶液

10%磷钼酸溶液

1%硝酸铀溶液

10.2%硝酸银溶液

硝酸银10.2克

蒸馏水100毫升

4.1%氢氧化钠溶液

氢氧化钠3.1克

蒸馏水100毫升

氨银溶液

硝酸银溶液5毫升

逐滴加入浓氢氧化铵至形成的沉淀几乎完全溶解时,加入氢氧化钠溶液5毫升

溶液中沉淀再次出现,再逐滴加入浓氨水至溶液变澄清。加蒸馏水使该溶液体积达50毫升。

还原溶液

蒸馏水50毫升

40%中性福尔马林0.5毫升

1%硝酸铀 1.5毫升

0.2%氯化金溶液(见第15章)

5%硫代硫酸钠溶液(见第15章)

核固红溶液(见第15章)

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)磷钼酸溶液中还原1分钟;

(3)流水充分漂洗至黄色溶液的所有痕迹均消失;

(4)1%硝酸铀溶液1分钟;

(5)蒸馏水漂洗10~20秒;

(6)氨银溶液1分钟;

(7)95%酒精中快速浸一下;

(8)还原溶液中1分钟;

(9)蒸馏水漂洗;

(10)0.2%氯化金溶液中调色1分钟;

(11)蒸馏水漂洗;

(12)硫代硫酸钠溶液1分钟;

(13)水洗;

(14)核固红溶液复染5分钟;

(15)蒸馏水中充分漂洗;

(16)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,各2次,每次2分钟;

(17)树脂封固。

5.结果

网状纤维 黑色

胶原纤维 玫瑰

其他组织成分 红色

6.注意事项

(1)约5~7张切片通过氨银溶液后,该溶液就应更换。

(2)在氯化金中放置过长时间会导致网状纤维的上色过度,以致其在染色的最后呈红色。

九、DNA及RNA甲基绿—哌洛宁染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林或Carnoy氏固定剂。

2.切片石蜡,4微米。

3.试剂

1%甲基绿贮存液

甲基绿 1.0克

蒸馏水 100毫升

?鄢用以下步骤抽提溶液中的杂质——甲基紫。

氯仿抽提法:

(1)把100毫升l%甲基绿贮存液注入一分液漏斗中。然后加入等体积的氯仿,充分混合;

(2)抽提时间可为几个小时或过夜;

(3)弃去底部已变色的氯仿;

(4)重复加入等体积的氯仿直到氯仿变成无色。

一般而言,抽提3次,每次3小时,即可去除1%甲基绿贮存液中的杂质。该溶液此时可用于配制甲基绿—哌洛宁工作液。

1%哌洛宁Gs贮存液

哌洛宁Gs 1克

蒸馏水100毫升

略微加热并不断地搅拌至哌洛宁溶解。

甲基绿—哌洛宁工作液

1%甲基绿溶液(抽提后) 70毫升

1%哌洛宁Gs贮存液30毫升

用l%醋酸钠溶液调pH至4.8。用前放置过夜。不过滤。

1%醋酸钠溶液

醋酸钠1克

蒸馏水100毫升

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)甲基绿—哌洛宁工作液2分钟;

(3)吸水纸吸干切片,晾5分钟;

(4)将每张切片分别在蒸馏水中快速浸1~2次进行分化镜检。如果切片仍然太红再在80%冷酒精(-5℃)中快速分化;

(5)在丙酮中快速浸2或3次以开始脱水;

(6)经过等体积混合的丙酮和二甲苯,进行完全脱水及透明,每步2次,每次1~2分钟;

(7)中性树脂封固。

5.结果

RNA红色

DNA蓝到蓝绿色

十、Luna氏肥大细胞染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,6微米。

3.试剂

醛品红溶液(见第15章)

铁苏木素工作液(Welgert氏) (见笫15章)

甲基橙溶液

甲基橙0.25克

95%酒精100毫升

4.步骤

(1)脱蜡水化到95%酒精;

(2)醛品红溶液染30分钟;

(3)95%酒精漂洗;

(4)Weigert氏铁苏木素工作液染1分钟;

(5)流水洗10分钟;

(6)95%酒精漂洗;

(7)甲基橙溶液染5分钟或到背景为淡黄色为止;

(8)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;

(9)树脂封固。

5.结果

肥大细胞紫色

弹力纤维紫色

其他细胞成分蓝色

背景黄色

十一、Luna氏红细胞及嗜酸性细胞颗粒染色法

1.固定10%中性缓冲福尔马林。

2.切片石蜡,6微米。

3.试剂

铁苏木素工作液(见第15章)

1%比布里希猩红溶液(见第15章

苏木素—比布里希猩红溶液

Welgert氏铁苏木素工作液45毫升

比布里希猩红溶液 5毫升

1%酸酒精溶液(见第15章)

0.5%碳酸锂溶液

4.步骤

(1)脱蜡至蒸馏水;

(2)苏木素—比布里希猩红溶液染5分钟;

(3)1%酸酒精中分化,使核的细节显示良好。一般只需在其中浸8下即可;

(4)自来水漂洗;

(5)浸入碳酸锂溶液中至切片变蓝或红细胞变成鲜红色,一般浸5下即可;

(6)流水冲洗2分钟;

(7)95%酒精、纯酒精及二甲苯脱水透明,每步2次,每次2分钟;

(8)树脂封固。

5.结果

嗜酸性颗粒红色

红细胞红色

Charcott Leyden晶体红色

背景蓝色

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