十一、基因诊断的基本概念、技术及应用。基因治疗的基本概念及基本程序
基因诊断的基本概念：所谓的基因诊断就是利用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。
基因诊断的技术：主要方法有核酸分子杂交、聚合酶链反应、基因测序、基因芯片。
基因诊断的应用：广泛地应用于遗传病、肿瘤、心血管疾病、感染性疾病等重大疾病，除在早诊早治、疗效判断、鉴别诊断、分期分型、预测预后中发挥作用外，在判断个体疾病易感性，器官移植组织配型和法医学等方面均起着重要作用。
基因治疗的基本概念：将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治疗疾病目的的方法，均谓之基因治疗。基因治疗采用的方法：基因矫正、基因置换、基因增补、基因失活。
基因治疗基本程序：根据实施路线的不同，基因治疗可分为间接体内疗法和直接体内疗法。基因治疗的间接体内疗法的基本程序包括：治疗性基因的选择，基因载体的选择，靶细胞的选择，基因转移，外源基因表达的筛检，回输体内，并观察治疗效果等。
十二、常用的分子生物学技术原理和应用
常用分子生物学技术的原理：
1.分子杂交。是利用DNA变性与复性这一基本性质来进行DNA 或RNA 定性或定量分析的一项技术。分子杂交技术的原理主要涉及分子杂交特性、印迹技术、探针技术等。印迹技术是将在凝胶中分离的生物大分子转移或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。
探针是指用放射性核素或其他化合物标记的核酸片段，它具有特定的序列，能够与待测的核酸片段互补结合，因此可以用于检测核酸样品中的特定基因。
2.蛋白印迹技术。是将混合蛋白质电泳分离后，转移到NC 膜或其他膜上，蛋白质的分析主要靠抗体来进行。
3.PCR 技术。可以在体外将微量的目的DNA片段扩增一百万倍以上。基本工作原理就是以DNA分子为模板，以一对与模板序列相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，完成新的DNA 合成，重复这一过程，使目的DNA片段得到扩增。PCR 的基本反应步骤包括变性、退火和延伸。
4.核酸序列分析。主要有化学裂解法和DNA 链末端合成终止法。
（1）化学裂解法。是根据某些化学试剂可以使DNA 链在一个碱基或两个碱基处发生专一性断裂的特性。精确地控制反应强度，可以使一个断裂点仅存在于少数分子中，不同分子在不同位点断裂，从而获得一系列大小不同的DNA片段，再将这些片段经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。在分析前，用放射性核素标记DNA 的5’末端，经放射自显影就可以在X 线胶片上读出DNA链的序列了。
（2）DNA链末端合成终止法。将2’，3’‐双脱氧核苷酸（ddNTP）掺入到合成的DNA链中，由于脱氧核糖的3’位碳原子上没有羟基，因此不能与下一位核苷酸反应形成磷酸二酯键，DNA合成反应即终止。在测定时，首先将模板分为四个反应管，分别加入引物和DNA聚合酶，将用32P 或35S 标记的dNTP（仅标记一种即可）作为底物掺入到新合成的DNA链中。反应一定时间后，每一管内加入四种ddNTP中的一种，就可获得一系列在不同部位终止的、大小不同的DNA片段。经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离这些片段，再通过放射自显影就可以读出DNA的序列。
常用分子生物学技术的应用：
（1）DNA印迹技术主要用于基因组DNA的定性和定量分析。
（2）RNA印迹技术目前主要用于检测某一些组织或细胞中已知的特异mRNA的表达水平，也可以比较不同组织和细胞中的同一基因的表达情况。
（3）蛋白印迹技术用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用研究等。
（4）PCR 技术主要用于基因的克隆、基因的体外突变、DNA和RNA的微量分析、DNA序列测定和基因突变分析。
十三、基因组学的概念，基因组学与医学的关系
基因组学的概念：基因组学是发展和应用DNA制图、测序新技术以及计算机程序，分析生命体全部基因组结构与功能。基因组学包括三个不同的亚领域，即结构基因组学、功能基因组学和比较基因组学。
（1）结构基因组学。是通过HGP的实施来完成的。HGP的内容就是制作高分辨率的人类基因的遗传图和物理图，最终完成人类和其他重要模式生物全部基因组DNA序列测定，因此HGP属于结构基因组范畴。
（2）功能基因组学。描述基因组所有基因的功能，包括研究基因的表达及其调控模式，这就是功能基因组学。实现功能基因组学研究需要分子生物学实验室工作与生物信息学中的计算机分析相结合。
（3）比较基因组学。涉及比较不同物种的整个基因组，以便深入理解每个基因组的功能和进化关系。
基因组学与医学的关系：基因组学与医学相结合推动了“遗传医学”，即“分子医学”的发展。基因组学使医学家对疾病有了新的认识，推动了疾病发病机制、临床疾病诊断、病因学和治疗学的进步。基因组学还改变当前病理学的格局和发展方向，为药理学的发展开辟了新领域，推动新一代药物的开发。
模拟试题
（一）
一、A 型题。在每小题给出的A、B、C、D 四个选项中，请选出一项最符合题目要求的。
1.生物体内能量转换的基本方式是
A.三羧酸循环
B.底物水平磷酸化
C.氧化磷酸化
D.ATP‐ADP循环
2.下列哪一种物质不属于一碳单位
A. CH2
B. CH
C. CH NH
D.COOH
3.血氨升高的主要原因是
A.食入蛋白质过多
B.肝功能障碍
C.肾功能障碍
D.以上都不是
4.下列哪种物质可作为体内从头合成IMP 和UMP 的共同原料？
A.氨甲酰磷酸
B.PRPP
C.天冬酰胺
D.N5，N10次甲基四氢叶酸
5.Meselson 和Stahl 利用15N 标记大肠杆菌DNA 的实验，证明下列哪个问题？
A.蛋白质生物合成以mRNA 为模板
B.DNA 分子的双链碱基是互补的
C.DNA 分子上的遗传信息可转录至mRNA
D.DNA 半保留复制机制
6.以下关于tRNA的叙述，错误的是
A.RNA聚合酶Ⅲ 参与tRNA前体的生成
B.tRNA前体在酶作用下切除5′和3′末端多余的核苷酸
C.tRNA3′末端需加ACC OH
D.tRNA前体还需要进行化学修饰加工
7.不对称转录是指
A.双向复制后的转录
B.同一单链DNA模板转录时可从5′ → 3′延长或从3′ → 5′延长
C.不同基因的模板链并非永远在同一DNA单链上
D.转录经翻译生成多肽中的氨基酸含有不对称碳原子
8.下列关于氨基酸密码的叙述，哪一项是正确的
A.由DNA链中相邻的三个核苷酸组成
B.由mRNA上相邻三个核苷酸组成
C.由tRNA 结构中相邻三个核苷酸组成
D.由rRNA 中相邻的三个核苷酸组成
9.肝脏的生物转化反应不包括
A.水解反应
B.氧化反应
C.还原反应
D.羧化反应
10.凝集素的制备过程中，洗脱凝集素用
A.NaCl 溶液
B.葡萄糖溶液
C.蒸馏水
D.磷酸缓冲液
11.下列哪两种氨基酸既能与茚三酮反应，又能在280nm 发生紫外吸收峰？
A.丙氨酸及苯丙氨酸
B.酪氨酸及色氨酸
C.丝氨酸及甘氨酸
D.精氨酸及赖氨酸
12.有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pI 为4.6、5.0、5.3、6.7、7.3，电泳时欲使其中四种泳向正极，缓冲液的pH 应是多少
A.4.0
B.5.0
C.6.0
D.7.0
13.在核酸中，核苷酸之间的连接方式为
A.2′，3′‐磷酸二酯键
B.3′，5′‐磷酸二酯键
C.2′，5′‐磷酸二酯键
D.糖苷键
14.下列关于酶的辅基的叙述哪项是正确的
A.与酶蛋白的结合比较疏松
B.由活性中心的若干氨基酸残基组成
C.只决定酶的专一性，不参与化学基团的传递
D.一般不能用透析或超滤方法与酶蛋白分开
15.下列何种酶既参与糖酵解也参与糖异生过程
A.丙酮酸羧化酶B.葡萄糖‐6‐磷酸酶C.3‐磷酸甘油醛脱氢酶D.果糖二磷酸酶
16.1摩尔软脂酸在体内彻底氧化生成多少摩尔ATP
A.129
B.96
C.239
D.86
17.脂肪细胞酯化脂肪酸所需的甘油
A.主要来自葡萄糖
B.由糖异生形成
C.由脂解作用产生
D.由氨基酸转化而来
18.下列哪一生化反应在线粒体内进行
A.脂肪酸的生物合成
B.脂肪酸－氧化
C.酮体的生成
D.胆固醇的生物合成
二、B 型题。A、B、C、D 是下面两道小题的备选项，请从中选择一项最符合题目要求的，每个选项可以被选择一次或两次。
A.帽子结构
B.polyA 尾巴
C.外显子
D.内含子
1.真核生物成熟mRNA 的5′末端具有
2.mRNA 在剪接过程中被切除的是
A.细胞原癌基因
B.抑癌基因
C.病毒癌基因
D.操纵子调节基因
3.Rb 基因是一种
4.Ras 基因家族属于
A.锌子结构
B.顺式作用元件
C.反式作用因子
D.模序
5.启动子是一种
6.调控基因表达的蛋白质属于
三、X型题。在每小题给出的A、B、C、D四个选项中，至少有两项是符合题目要求的。请选出所有符合题目要求的答案，多选或少选均不得分。
1.对酶来说，下列描述正确的是
A.所有的酶都是蛋白质
B.酶具有特异性
C.酶可以增大反应的活化能
D.酶对反应条件有特定要求
2.真核生物mRNA 转录后修饰包括
A.切除外显子
B.加上polyA 尾巴
C.把所有嘌呤甲基化
D.5′端加帽子结构
3.基因表达调控的意义是
A.适应环境、维持生存
B.维持细胞生长、分裂
C.调节细胞发育、分化
D.维持个体生长、发育
4.可以用于样品分离的仪器有
A.离心机
B.分光光度计
C.天平
D.电泳仪
（二）
一、A 型题。在每小题给出的A、B、C、D 四个选项中，请选出一项最符合题目要求的。
1.DNA 连接酶在下列哪一个过程中是不需要的
A.DNA 复制
B.DNA 修复
C.DNA 断裂和修饰
D.制备重组DNA
2.真核mRNA 后加工的顺序是
A.加帽、运出细胞核、加尾、剪接
B.加帽、剪接、加尾、运出细胞核
C.剪接、加帽、加尾、运出细胞核
D.加帽、加尾、剪接、运出细胞核
3.关于蛋白质生物合成中的肽链延长阶段，正确的是
A.核蛋白体向mRNA5′端移动3个核苷酸的距离
B.肽酰基移位到核蛋白体大亚基的给位上
C.GTP 转变成GDP 和无机磷供给能量
D.核蛋白体上的tRNA 从给位向受位移动
4.主要的生物转化器官是
A.肝
B.肾
C.肠
D.肺
5.离子交换层析分离混合氨基酸时，洗脱天冬氨酸用
A.pH 5.0，0.1mol/L 柠檬酸缓冲液
B.0.1mol/L NaOH 溶液
C.2mol/L HCl 溶液
D.pH 2.2，0.1mol/L 柠檬酸缓冲液
6.蛋白质分子的一级结构概念主要是指
A.组成蛋白质多肽链的氨基酸数目
B.氨基酸种类及相互比值
C.氨基酸的排列顺序
D.二硫键的数目和位置
7.白化病是由于缺乏
A.色氨酸羟化酶
B.酪氨酸酶
C.苯丙氨酸羟化酶
D.以上都不是
8.脂类薄层层析中使用的显色剂是
A.茚三酮
B.考马斯亮蓝
C.磷钨酸
D.磷钼酸
9.DNA 分子中不存在的核苷酸是
A.dAMP
B.dGMP
C.dTMP
D.dUMP
10.在琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸氧化反应体系中加入一定浓度的丙二酸，结果导致反应速度显着减慢，如再提高琥珀酸浓度，酶反应速度重又增加，此作用属
A.酶的激活作用
B.不可逆抑制作用
C.竞争性抑制作用
D.非竞争性抑制作用
11.酶的化学本质是
A.多糖
B.脂类
C.蛋白质
D.氨基酸
12.下列关于糖的有氧氧化的描述，正确的是
A.是需氧生物体内所有组织细胞获得能量的主要方式
B.糖酵解抑制有氧氧化
C.1分子葡萄糖彻底氧化过程中有6个底物磷酸化反应
D.产生的NADH，与保护红细胞膜完整性有关
13.密度最低的血浆脂蛋白是
A.乳糜微粒
B.β 脂蛋白
C.前β 脂蛋白
D.α 脂蛋白
14.下列关于反转录酶作用的叙述错误的是
A.RNA 为模板合成DNA
B.需要一个具有3’‐OH 的引物
C.cDNA 链的延长，其方向为3’ → 5’
D.底物是四种dNTP
二、B 型题。A、B、C、D 是下面两道小题的备选项，请从中选择一项最符合题目要求的，每个选项可以被选择一次或两次。
A.胆色素
B.胆汁
C.胆汁酸
D.黄疸
1.铁卟啉化合物的主要分解代谢产物是
2.胆固醇的代谢去路是合成
A.口角炎
B.夜盲症
C.脚气病
D.巨幼红细胞贫血
3.缺乏维生素A 可引起
4.缺乏维生素B12可引起
三、X 型题。在每小题给出的A、B、C、D 四个选项中，至少有两项是符合题目要求的。请选出所有符合题目要求的答案，多选或少选均不得分。
1.可用于蛋白质相对分子质量测定的方法包括
A.SDS‐PAGE
B.亲和色谱
C.排阻色谱
D.透析
2.分离生物大分子常用到的色谱包括
A.离子交换色谱
B.亲和色谱
C.排阻色谱
D.吸附色谱
