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第32章 养殖技术的开发和应用(3)

2.5.2精液品质评定项目及方法

2.5.2.1精液的颜色、稠度和污染度。健康公鸡的精液颜色为乳白色或略呈黄色,质地如奶油状。如果颜色不一致,混有血、粪、尿等,或者透明,都是不正常的精液,且这种精液不会有好的受精率。混有血液的精液是红色,被粪污染的精液是带有黄褐色,混有尿的精液呈白色棉絮状,混有大量透明液的精液呈水溢状。在这种情况下,必须检查饲养管理制度、饲料质量、有无发病和公鸡换羽等,然后采取措施加以改进。不正常的精液不能与正常的精液混合输精,宁少勿滥。

2.5.2.2射精量。射精量的多少,依家禽的品种、品系、年龄、生理状况、光照制度、饲养与管理条件而不同。同时也与种用公禽的使用制度和采精的熟练程度有关。射精量可以从有刻度的集精杯上直接读出。鸡一般为0.2~15mL,火鸡0.25~0.4mL,鸭为0.2~0.7mL,鹅为0.l~13mL。

有关资料报道,蛋用品种公鸡的平均射精量为0.34mL,变化范围从0.05mL到1mL。大部分公鸡射精量在0.2~0.5mL之间,中型品种公鸡的射精量要比轻型品种的公鸡高得多。

2.5.2.3精子活力。所谓精子的活力是指精液中直线前进运动的精子数占精子总数的百分比,即精子的多寡程度。它是鉴定精液品质最主要指标之一,它对种蛋受精率的影响程度,较之输精量和精子密度更为重要。因为只有活力高的精子才有运动能力通过曲折而长达70cm左右的母鸡输卵管,到达漏斗部与卵子结合受精。密度大而精子活力差的精液,也不能用来人工输精。精子活力一般以10分制进行评定。精子的平均活力为8分,范围从3分到10分,最普遍的为6~8分。只要精子活力高,输精量中精子浓度略低些也不影响受精率。

精子活力受温度影响大,检查时要在40~42℃条件下进行。

1.目测法。取一滴精液放在载玻片上,密度大时可加一滴生理盐水,盖上盖玻片,置于显微镜下放大150~400倍检查,观察不同层次精子运动情况,快速、准确的评定。此法应用广泛,优点是快速、简单,但因其主观性,造成误差大。

2.计算法。用血球计算器计算一定容积内死精子数,再计算同样容积内总精子数而计算出精子活率。

3.美蓝退色时间测定。根据美蓝退色时间便可判定精液中所含活动精子数量多少。如果精液里活精子越多,美蓝退色愈快。优质精液美蓝退色时间鸡为4~5min,鹅为7~9min。

2.5.2.4精子密度。这是鉴定精液品质的另一项重要指标,是指l mL精液中所含有的精子总数。

1.评等级法。用原精液目测精子活力时,估测精子密度。一般粗略地把精子密度分为稠密、中等和稀薄三个等级。精液放地显微镜下观察就会发现,稠密的精液中精子数量很多,密密麻麻的几乎没有空间,精子运动互相阻碍。稀薄的精液,精子数目少,观察直线运动的精子很明显,精子与精子之间距离很大。视野中精子数目及精子之间距离介于密与稀两种精液间的为密度中等的精液。鸡的精子密度一般为20~40亿/mL、变化范围为5~100亿个/mL,选作人工授精的公鸡,其精液浓度应在30亿个/mL以上。火鸡40~50亿/mL、鸭10~60亿/mL,鹅为2~25亿/mL。

2.计算法。为求出更为准确的密度,用血球计来计算精子密度。

2.5.2.5精子形态学检查。它包括精子畸形率检查和精子顶体完整率检查,精子形态正常与否同受精率有密切关系,亦是精液品质的重要指标之一。检查方法与家畜相同。

2.5.2.6精液的酸碱度。精液中氢离子浓度平均180mol/L (pH6.75),其范围为39.81~631mol/L (pH6.2~7.4)。精液中有大量的弱酸盐,如碳酸盐、柠檬酸盐等起缓冲剂的作用,可以中和代谢过程中和精子死亡后产生的大量碱性化合物。抓公鸡,按摩采精过程中,精液中落入酸性或碱性物质和公鸡泄殖腔腺的分泌物,是精液酸碱度变化的原因。精子保存过程中因微生物繁殖,可能向偏酸性变化。

新采的家禽精液可用PH试纸测定PH值。在一般情况下公鸡精液PH值以7为好,鹅的精液PH值都在7以上。精子在酸性环境中其活动受到抑制,碱性环境会促进精子活动,而加快其死亡。

2.5.2.7存活力。是反映精子在体外一定条件下生存延续的时间和精子活力下降速度的一项指标。检查方法是精液采下后保存于48.5℃恒温箱内,30min后开始第一次检查,以后每隔10min检查一次,直至精子全部死亡为止。存活力指从第一次检查到精子全部死亡的时间间隔,以分钟为单位。

2.6家禽精液的稀释与保存

目前在生产实践中,家禽精液多为现采现用,不作稀释保存。事实上在室温下采下的未经稀释的新鲜精液,其代谢很强烈,能量消耗快,同时因代谢产物的积累,改变了PH值,导致某些酶的活性被抑制,致使精子丧失活力,甚至死亡,几小时精液的品质就会受到影响,所以不能把公鸡的精液都采完再集中去输精,输精持续时间长,从而影响种蛋的受精率。其二,在进行家禽育种工作中,稀释液能延长精子在体外的存活时间,因此,采精和输精时间的安排自由度就大多了。这样,种鸡场之间通过交换精液就可解决引种的问题,运输精液同引种蛋相比,费用低廉而又能消除运输途中与传染源接触。种公鸡除了传统上起配种繁殖作用以外,还可通过出售精液而赢得经济效益,因此进行稀释保存是很有必要的。

精液稀释保存和运输精液问题的解决,为国际间交换种质资源和家禽基因库的充实提供了有利的条件。

2.6.1家禽精液的稀释

精液的稀释是指在精液里加入一些配制好的适于精子存活并保持受精能力的溶液。鸡的精液稀释液有美国的BPSE稀释液、英国的Lake稀释液、原苏联的BNPRK-2稀释液、C-2稀释液和我国的BJJX液等等。实验室观察发现,适当的PH、渗透压和含有葡萄糖等适宜环境条件,并保存于一定的温度条件下能使精子降低代谢速率,维持其细胞膜的完整性,保持其受精能力,可延长精子的生存时间。

其优点:稀释后可扩大精液量,多配母禽;延长精子在体外存活时间;便于人工授精和进行长途运输。注意事项:用于稀释保存的精液应是无粪尿污染,透明液少的精液。家禽精液中含有一些透明液,但因其能提高精子代谢速率,不利于保存,因此用于保存的精液要尽量减少透明液含量。精液采下后要保温并尽快进行稀释;稀释液的温度要与精液在同温条件下进行,可将稀释液沿玻璃棒缓慢倒入精液中,再混匀。

2.6.2家禽精液的保存

2.6.2.1家禽精液的液态保存。分为常温保存和低温(2~5℃)保存。常温保存家禽精液的温度尚有不同研究报导,有40~40.5℃、13~13.5℃和稀释后的37~40℃等温度下保存,在半小时内输精。低温保存,在2~5℃温度下可保存几小时到几天,且在有氧条件下更能良好的生存。

2.6.2.2家禽精液冷冻保存。英国人于1949年第一个成功地用甘油作冷冻保护剂冷冻鸡的精液。受精首次成功的是Polge等在1950年,受精率仅为0.5%,以后逐步上升。近年来家禽精液冷冻在实验阶段已得到相当高的受精率,据报道鸡冷冻精液的受精率最高可达98%,鹅、鸭冷冻精液受精率在90%以上,重型火鸡为80%,轻型火鸡为90%。但发展到实用技术还有一些问题。

1.首先是冷冻保护剂的问题。用甘油作冷冻保护剂,能使精子在冷冻和解冻后能动性得到改善,但伴随的是输精后丧失受精能力,甘油引起精子受精率丧失的机制仍未清楚。多次观察发现,甘油对受精后的胚胎没有影响,但解冻后离心分离,对精子损伤很大。

2.其次家禽精液解冷冻温度问题。大多数研究报道在-79℃~-176℃之间。安徽农学院何美德研究认为:鸡精液冷冻最佳温区为一56.6℃~-118.5℃,在此温度冷冻精液,精子活力最佳。

3.冷冻材料不同,冷冻后精子活力不同,以氟板、铜网作冷冻材料为好。

4.甘油对精于运动能力有保护作用,但对鸡精子顶体有破坏作用;而卵黄对精子顶体有保护作用。

5.从冻后精子活力衡量,降温平衡1~2h与降温平衡4~6h相比差异不显著。降温平衡时间在l~6h均可。

6.解冻温度也影响精液质量,多数人认为35~40℃快速解冻,也有主张2~5℃解冻法。

7.至于输精深度,多数实验证明深部输精(12~13cm)为好,但2~4cm的深度输精也得到较高受精率。输精精子数量,如新鲜精液的精子数为1亿,冷冻精液则要7~10亿。

综上所述,虽然家禽精液冷冻保存已取得了不少进展,但受精率远低于鲜精。这项技术还有待进一步完善才能很好地应用于生产。

2.6.2.3家禽精液冷冻程序。精液稀释、降温和平衡、冷冻及解冻。

1.精液稀释。家禽精液冷冻可选用液态保存稀释后再添加抗冻剂和卵黄。抗冻剂的保护作用是由其结构决定的,凡是羟基化合物一般都有不同程度的保护作用,常用的防冻剂有甘油、二甲基亚砜、乙烯二醇等。一般添加量甘油为3~10%,二甲基亚砜为4~6%、乙烯二醇为4~10%。抗冻剂可一次加入,也可在冷冻前加入。稀释倍数视精子密度而定,采精后尽快稀释。

2.降温和平衡。降温是指由30℃以上温度降至0~5℃的过程。为避免低温打击,要缓慢降温。平衡是指在0~5℃条件下精子的适应过程。目的是重建离子平衡,同时使精子为冷冻做好生理上准备。降温平衡时间因不同种类家禽和用不同抗冻剂而异。

3.冷冻。冷冻精液有三种分装方法:塑料细管、颗粒和安瓿法。钢管法最好,其次为颗粒法。颗粒法冷冻可用氟板和铜纱网(18~20目)。冷冻多用液氮薰蒸法。冷冻温度目前尚未有公认的理想降温曲线。

4.解冻。方法和速度影响精液品质、目前多使用35~40℃水浴解冻和2~5℃水浴解冻。

2.6.2.3鸡的精液冷冻程序。

1.颗粒法。稀释液配方:配方Ⅰ:5.7%葡萄糖85mL、甘油5mL 卵黄15mL。配方Ⅱ:乙烯二酸8mL、牛奶8mL,在上述稀释液中每ml添加青霉素1000单位(0.6mg)、链霉素1000单位(1.0mg)。精液采下后,一般按1:1~3稀释。降温和平衡:用棉花包住精液瓶在2~5℃条件下放置2~4h。滴冻:在铜纱网上滴冻,滴冻温度为-56℃~-118℃,铜纱网约距离液氮面2.5~3.5cm,滴成颗粒后熏蒸1~2min。颗粒大小可为0.09~0.11mL。解冻:解冻液可用5.7%葡萄糖准,解冻温度35~40℃。贮存:解冻镜检合格者则可装入纱布袋,并在袋上注明品种、数量、冷冻日期等,然后浸入液氮贮存。

2.钢管法(贝尔茨维尔法)。稀释:用贝尔茨维尔家禽稀释剂稀释。降温和平衡:用2h降温至5℃后,加入4%二甲基亚枫,再平衡2h,用0.5mL细管分装(并事先印上品种日期等)。冷冻:保存于5℃~-20℃时降温速度为1℃/min,在-20℃~-125℃降温速度50℃/min,-125℃~-196℃降温速度160℃/min。解冻:细管放入2℃水中解冻。

2.7精液的远距离运输

运输优秀种公禽的精液,是育种工作中互相交换种质资源的先进方式之一。与购买种雏种蛋相比,运输精液花钱要少得很多,尤其重要的是能排除途中与传染源接触和由种蛋种雏带进垂直感染的疾病。

运输成功的决定性因素是精液的质量、稀释液的成分、精液保存时间的长短、采精与稀释之间的时间间隔、运输时防止强烈的震荡等,而与运输距离关系不大。

2.8影响家禽人工授精率的因素

人工授精时受精率不高的原因多种多样,有些可能是一个因素,有些可能是2~3个因素同时起作用。

2.8.1种用公禽的精液品质不合格

精液中精子密度较低,即使有足够的输精量,也不能保证有足够的精子数量;精子活力不高,死精和畸形精子多,这是影响受精率的主要因素。实践证明,有些公鸡射精量虽少,但精子浓度和精子活力很高,输精量略低,仍能取得很高的受精率;采精时精液被血、粪、尿等污染,造成精子死亡,也是影响受精率的因素之一。因此挑选精液品质好的公鸡和在采精时保证采到清洁的精液对提高蛋的受精率十分重要。

2.8.2母禽不孕和生殖道有疾病

在进行家系选育时早已发现,家禽中有些母禽产蛋很好,但由于生理原因或疾病,不管怎样输精,蛋都不受精。鸡群中这种母鸡增多,蛋受精率必然降低。

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