1.7.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
1.7.1原理：具有半乳糖苷酶的细菌，能水解ONPG而释放出黄色的邻硝基酚。
1.7.2试剂：
A.缓冲液：称取磷酸二氢钠（NaH2PO4·H20）6.9g，溶解于45ml蒸馏水中，加约3ml30％氢氧化钠，调pH7.0，并补足水至50ml，放4℃冰箱中备用。若析出结晶，用前稍加温使其溶解。
B.ONPG液：称取80mg ONPG（邻硝基酚β-半乳糖苷），溶于15ml蒸馏水中，置37℃中，加入5ml缓冲液。溶液应是无色，置4℃冰箱保存，若出现黄色，则不能应用。使用前，先将ONPG液加温至37℃。
1.7.3试验方法：将试验菌接种到三糖铁或1％乳糖肉汤琼脂上，经37℃培养过夜。挑取1满环试验菌置于O.25ml生理盐水中，制成悬液，置37℃5min，加1滴甲苯，摇匀，以利于半乳糖苷酶的释放。取O.25ml ONPG液加入悬液中，置于37℃水浴中，分别在30min和3h后观察，若呈现黄色者为阳性。
1.8.七叶苷水解试验
1.8.1原理：有些细菌能分解七叶苷，其代谢产物与铁离子结合，产生黑色沉淀。
1.8.2培养基：胰蛋白胨1.5g
枸橼酸铁0.2g
七叶苷0.1g
蒸馏水100ml
安氏指示剂（Andrade，s indicator）（或胆汁2.5m1）lml
琼脂2.0g
除指示剂及琼脂外，各成分溶解后，调整pH值为7.0，加入琼脂煮沸溶解后，再加入指示剂，混匀后，分装试管。经115℃2灭菌10min，摆成斜面。省去琼脂，液体培养基同样可用。
1.8.3试验方法：将培养18～24h的试验菌接种于上述培养基上，37℃培养24h观察，若培养基变黑色则为阳性。
1.9石蕊牛乳试验
1.9.1原理：在牛乳中加入石蕊是作为酸碱指示剂和氧化还原指示剂。石蕊在中性时呈淡紫色；酸性时呈粉红色；碱性时呈蓝色；还原时则自下而上褪色。
1.9.2培养基：
A.脱脂乳的制备：取新鲜牛奶，煮沸后冷却，经两次离心（3000r/min，10min），除去上层脂肪，即得脱脂乳。
B.2.5％石蕊水溶液的配制：石蕊2.5g
蒸馏水100ml
将石蕊浸泡在蒸馏水中过夜，使石蕊变软易溶解，必要时再用乳钵研磨，过滤即得石蕊液。
C.石蕊牛乳的配制：脱脂牛乳100ml
2.5％石蕊液0.4ml
1.6％溴甲酚紫酒精溶液0.1ml
混匀后，分装试管，间歇灭菌3次。如培养厌氧菌，则在乳上面加盖一层灭菌石蜡。
1.9.3试验方法：试验菌接种培养基中，37℃培养1～7d，观察产酸、产碱、胨化等反应。
A.产酸：细菌发酵乳糖产酸，使石蕊变红。
B.胨化：细菌产生蛋白酶，分解酪蛋白，故牛乳变得澄清。
C.产碱：细菌分解酪蛋白产生碱性物质，使石蕊变蓝。
D.酸凝固：细菌发酵乳糖，使石蕊变红，当酸度很高时，可使牛乳凝固。
E.凝乳酶凝固：某些细菌能产生凝乳酶，使牛乳中的酪蛋白凝固，此时石蕊呈蓝色或不变色。
F.还原：细菌生长旺盛，使培养基氧化还原电势降低，因而石蕊褪色。
1.10.甘油品红试验
1.10.1原理：甘油经酵解作用生成丙酮酸并脱羧生成乙醛，乙醛与无色品红生成醌式化合物呈紫色。
1.10.2培养基：
A.牛肉膏1.0g
蛋白胨2.0g
蒸馏水100mL
溶解以上各成分，pH值为8.0
B.10％碱性品红酒精溶液0.2ml
C.新配制的10％无水亚硫酸钠水溶液1.66ml
D.甘油1.0ml
取A加D后，12l℃灭菌l5min备用。临用时加入B和C，分装无菌试管。
1.10.3试验方法：试验菌接种于上述培养基中，37℃培养，观察8d，并设同样培养基作空白对照。若阳性呈紫色，弱阳性呈紫红色，阴性与对照管颜色一样。
2.蛋白质及氨基酸代谢试验
2.1靛基质试验（吲哚试验）
2.1.1原理：有些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸而产生吲哚，吲哚与对位二甲基氨基苯甲醛作用，可形成玫瑰吲哚而呈红色。
2.1.2培养基。
A.需氧、兼性厌氧菌用：蛋白胨1.0g
氯化钠0.5g
色氨酸（可省去）0.1g
蒸馏水100ml
溶解各成分，调整pH值为7.4—7.6，分装试管，经115℃灭菌20min。
B.厌氧菌用：胰蛋白胨2.Og
葡萄糖0.1g
磷酸氢二钠（Na2HPO4）0.2g
硫乙醇酸钠0.1g
琼脂0.1g
蒸馏水100ml
溶解各成分，调整pH值为7.4～7.6，分装试管，经115℃灭菌20min。
2.1.3试剂：（此配方为Koracs试剂）
对二甲基氨基苯甲醛5.Og
95％乙醇75ml
浓盐酸25ml
对二甲基氨基苯甲醛溶于乙醇中，再缓缓加入浓盐酸即成。
2.1.4试验方法。试验菌接种于培养基中，37℃培养24-48h后，滴加试剂数滴于培养物液面，轻轻摇动，红色为阳性反应，黄色为阴性反应。
2.2硫化氢试验
2.2.1原理：某些细菌能分解培养基中含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与铁盐（或铅盐）相遇形成黑色硫化铁（或硫化铅）。
2.2.2培养基：
A.醋酸铅琼脂：营养琼脂（pH7.4）100ml
10％硫代硫酸钠溶液2.5ml
10％醋酸铅溶液3ml（113℃灭菌20min）
营养琼脂融化后，加入硫代硫酸钠混匀，115℃灭菌20min后备用。临用前加热熔化，加人灭菌的醋酸铅溶液，混匀后，分装于无菌试管，直立凝固。
B.厌氧菌用醋酸铅琼脂：胰蛋白胨10.0g
磷酸氢二钠（Na2HPO4）3.0g
葡萄糖1.0g
琼脂2.0g
10％醋酸铅溶液2ml（115℃灭菌20min）
蒸馏水1000ml
除醋酸铅溶液外，各成分加热熔解，pH值为7.6，经115℃灭菌20min，取出冷却至55℃左右，加入灭菌的醋酸铅溶液，混匀，分装试管，直立凝固。
注：穿刺接种后，应放在厌氧环境中培养；如用蛋白胨，用量改为20g。
C.三糖铁琼脂或硫酸亚铁琼脂，用于肠杆菌科细菌测定产生硫化氢能力。
2.2.3试验方法：
A.试验菌穿刺接种于培养基中，置37℃培养2～4d，如穿刺线上或试管底部变黑，则为阳性反应。
B.醋酸铅纸条法：首先将灭菌、烘干的滤纸条（6.5cm×0.6cm），浸泡在灭菌的饱和醋酸铅溶液（10g醋酸铅溶于50ml沸蒸馏水中，即为饱和醋酸铅溶液），浸透后取出，置无菌平皿内，37℃，烘干，保存于灭菌试管中。试验方法是将试验菌接种于营养肉汤或肝浸汤琼脂斜面，取一片醋酸铅滤纸条，夹在试管的棉塞下悬挂，置37℃培养1-2d，滤纸条变黑或棕褐色者为阳性反应。
2.3尿素酶试验
2.3.1原理：某些细菌含有尿素酶，能分解培养基中的尿素，产生大量的氨，使培养基变碱而呈粉红色。
2.3.2培养基：蛋白胨1.0g
氯化钠5.0g
磷酸二氢钾（KH2PO4）2.0g
葡萄糖1.0g
琼脂20.0g
蒸馏水1000ml
0.4％酚红溶液3ml
20％尿素溶液（过滤除菌）20ml
除尿素液、指示剂及琼脂外，各成分加热熔解，pH6.8～6.9，加入琼脂熔化后，再加指示剂混匀，115℃灭菌20min。取出培养基冷却至55℃，以无菌操作加人20％尿素液20ml，混匀后，分装无菌试管，摆成高层斜面。亦可制成液体培养基。
2.3.3试验方法：将试验菌浓密地接种在培养基中，置37℃培养3～12h，如接种于液体培养基并在37℃水浴中孵育，则得出结果更快。若培养基变粉红色者为尿素酶试验阳性。
2.4明胶液化试验
2.4.1原理：明胶是一种动物性蛋白，某些细菌产生的蛋白酶可使明胶蛋白分解。明胶培养基本身低于20℃凝固，高于24℃自行液化。明胶分解后其分子变小，虽在低于20℃的温度下亦不再凝固。
2.4.2肉汤培养基：肉汤培养基（pH7.4～7.6）100ml
明胶12.0g
明胶加入煮沸的肉汤中，在水浴中加热熔化，分装试管，经113℃灭菌20min。保存于4℃冰箱备用。
2.4.3试验方法：用穿刺法接种在试管中央，在20℃温箱中培养，一般细菌培养7d，缓慢液化的细菌应培养1个月。如明胶液化，则记录液化明显的时间。如夏天没有20℃的培养条件或在20℃温度下不能生长的细菌，则需培养在所需温度下。观察时，将试管取出放入4℃冰箱内30min，若仍不凝固者为阳性。
2.5酪蛋白分解试验
2.5.1原理：有些细菌能产生酪蛋白酶，分解酪蛋白，使菌落周围和下面酪蛋白被分解而产生透明轮廓。
2.5.2培养基：脱脂奶粉5g加蒸馏水至50ml（或用50ml脱脂牛奶），流通蒸气灭菌。琼脂1.5g加蒸馏水50ml，121℃灭菌20min。待冷却至45℃～50℃时，混合均匀，倾注平板。
2.5.3试验方法：平板倒置过夜，使表面水分干燥。将试验菌点种在平板上，每皿可点种3—5株菌。室温培养1、3、5d记录菌落周围和下面酪蛋白是否已被分解而呈透明。
2.6酪氨酸水解试验
2.6.1原理：酪氨酸为针状结晶，25℃时每1000ml水能溶解O.453g。具有酪氨酸酶的细菌能分解酪氨酸为更易溶于水的物质（如酚及丙氨酸），故菌落附近的结晶酪氨酸消失。
2.6.2培养基：营养琼脂（pH7.0）100ml
酪氨酸0.5g
营养琼脂熔化后，加入酪氨酸，完全混匀后，分装试管，经121℃灭菌30min，倾注平板或摆成斜面。
2.6.3试验方法：将试验菌接种后，置37℃培养3-7d，观察细菌生长附近的结晶酪氨酸（其溶解度低，故现结晶），若有消失为阳性反应。
2.7氨基酸脱羧酶试验
2.7.1原理：有些细菌含有氨基酸脱羧酶，使羧基脱出，生成胺类和二氧化碳，培养基中含胺类时呈碱性反应。
2.7.2培养基（此配方为Moeller氏法）
蛋白胨5.0g
牛肉膏5.0g
葡萄糖0.5g
吡哆醇（或用0.5％酵母膏代替）5mg
0.2％溴甲酚紫5ml
0.2％甲酚红2.5ml
蒸馏水1000ml
除指示剂外，将以上各成分溶解，调整pH值为6.0，加入指示剂。将基础培养液分成4等份，其中3份分别加入L-精氨酸、L-赖氨酸、L-鸟氨酸，使其浓度达1％。再调pH值为6.0。未加氨基酸的1份作为空白对照。分装小试管，每管3-4ml，上面加一层液体石蜡约0.5cm厚，115℃灭菌20min。
2.7.3试验方法：将试验菌接种上述培养基中，37℃培养18～24h观察结果。如指示剂呈紫色者为阳性反应；呈黄色者为阴性反应；对照管应为黄色。
2.8精氨酸双水解酶试验
2.8.1原理：精氨酸经精氨酸脱酰酶的作用，降解为胍氨酸和氨，胍氨酸再经胍氨酸酰脲酶的作用，降解为鸟氨酸、二氧化碳和氨；培养基变碱。
2.8.2培养基：蛋白胨1.0g
氯化钠5.0g
磷酸氢二钾（K2HPO4）0.3g
L-精氨酸盐10.0g
琼脂6.0g
酚红0.01g
蒸馏水1000ml
除酚红外，将以上成分加热熔解，调整pH值为7.0—7.2。加入指示剂，分装试管，并设有不含氨基酸的对照管，121℃灭菌20min。
2.8.3试验方法：取幼龄菌穿刺接种，同时接种不含氨基酸对照管，并用灭菌石蜡封管。适温培养3、4、7d。若培养基转为红色者为阳性（精氨酸脱梭酶阳性者，亦可引起培养基变红，精确方法是用液相色谱鉴定）；呈黄色者为阴性；对照管应是黄色。
2.9苯丙氨酸脱氨酶试验
2.9.1原理。某些细菌具有苯丙氨酸脱氨酶，能将苯丙氨酸氧化脱氨生成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化铁作用形成绿色化合物。
2.9.2培养基：DL-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸0.1g）0.2g
酵母浸膏0.3g
氯化钠0.5g
磷酸氢二钠0.1g
琼脂1.2g
蒸馏水100ml
除琼脂外，以上各成分溶解后，调整pH值为7.4，加入琼脂熔化，分装试管，每管3～4ml，经115℃灭菌15min，制成斜面备用。
2.9.3试剂：10％三氯化铁水溶液。
2.9.4试验方法。将试验菌接种于上述培养基，37℃培养18～24h（以细菌生长旺盛为佳）后，取出加10％三氯化铁4～5滴，斜面呈现绿色者为阳性反应。
3.碳源与氮源利用试验
3.1枸橼酸盐利用试验
3.1.1原理。某些细菌能利用枸橼酸盐作为惟一碳源，利用磷酸二氢铵作为氮源，能在此培养基上生长，并分解枸橼酸盐产生碳酸盐，使培养基变碱。
3.1.2西蒙氏（Simmons）枸橼酸盐培养基
枸橼酸钠5.0g
硫酸镁（MgSO4·7H2O）0.2g
磷酸氢二钾（K2HPO4）1.0g
氯化钠5.0g
磷酸二氢铵（NH4H2PO4）1.0g
琼脂20.0g
蒸馏水1000ml
1％溴麝香草酚蓝酒精溶液8ml
除指示剂和琼脂外，加热熔解各成分，调整pH值为6.8～7.0，加人琼脂熔化后，再加入指示剂，分装试管，121℃灭菌20min，摆成斜面，亦可制成液体培养基。
