（8）贴标签和菌丝体培养：试管接种后，在集装箱内每只试管上都要贴上标签，写明菌种编号、接种日期，然后取出试管放入24℃的条件下培养。菌丝长满试管斜面后就可以使用，转接到原种培养基上生产原种。
（9）杂菌检查和质量鉴定：在培养过程中要定期检查杂菌污染情况，及时挑出污染的试管，菌丝体长满试管后，要对菌丝体的质量进行鉴定，剔除菌丝弱的试管。
（第三节）双孢蘑菇原种的生产
原种又叫二级种，由母种繁殖而来，用来繁殖栽培种（三级种），为满足了大量生产栽培种的需要。
一、生产工艺流程
母种准备—培养基配方—培养基拌料—培养基装瓶—洗瓶口和外壁—瓶口塞棉塞—培养基灭菌—培养基冷却—接种—贴标签和菌丝体培养—杂菌污染检查和菌种质量鉴定。
二、母种准备
一般一支试管母种可接5瓶左右原种，根据原种生产数量提前准备好母种。
三、培养基配方
双孢蘑菇原种生产常用的培养基配方如下：
1、粪草培养基：发酵后的麦草（稻草）72%，发酵牛粪粉20%，麸皮5%，糖1%，碳酸钙1%，石膏1%，含水量62—65%。
2、牛粪粉培养基：发酵牛粪粉98%，碳酸钙2%，含水量62—65%。
3、棉籽壳培养基：发酵棉籽壳97%，麸皮5%，碳酸钙2%，石灰1%，含水量62—65%。
4、小麦培养基：小麦97%，碳酸钙2%，石膏1%，含水量50—55%ph值7.0左右。
四、培养基制作
1、粪草培养基制作：把发酵麦草切成2—3厘米，按配方比例加入牛粪粉、石膏、碳酸钙，充分拌均匀，糖溶解于水中加入培养基，培养基水分调至62—65%，即用手指紧压培养基可见水但不滴，培养料拌均匀后就可以装瓶。
2、牛粪粉培养基制作：牛粪粉经发酵晒干后粉碎过筛，按配方比例加入碳酸钙，用1%石灰水调整含水量至62—65%，ph值8.5左右，堆成一堆，待堆中培养料水分平衡后，再搅拌均匀后进行装瓶。
3、棉籽壳培养基制作：
（1）棉籽壳发酵：棉籽壳77%，牛粪粉20%，石膏1%，碳酸钙2%，混合均匀后加水到含水量达70%，进行建堆发酵，一般堆宽1.5米，高1.2—1.5米，当料温达到70℃左右时进行翻堆，一般3—4天翻一次堆，每次翻堆时，用1%的石灰水补充水分，含水量控制在65—70%，经过4—5次翻堆，棉籽壳中长满大量白色高温放线菌而培养料腐熟后，晒干备用。
（2）配制：按配方比例称取发酵棉籽壳和碳酸钙、麸皮，混合均匀，加入1%的石灰水，调整培养基的含水量达62—65%，堆成一堆让培养基水分平衡，装瓶前再拌均匀。
4、麦粒培养基制作：按配方称取麦粒，将麦粒浸泡在2%的石灰水中，石灰水的ph值11，夏天一般浸泡10—12小时，春天一般浸泡16—18小时，麦粒浸泡至透心后，把麦粒捞起来用清水冲洗干净，至ph值8，然后将麦粒放入沸水中煮至熟而不烂时为止，煮熟后捞起滤干水，后推开晾干，再加入碳酸钙和石膏拌均匀后装瓶。
五、培养基装瓶
装瓶就是把配制好的培养基装入接种瓶中，一般装至瓶肩处，粪草、棉籽壳培养基要求把培养基稍压实，麦粒培养基装好瓶后，要在培养基表面盖一层粪草培养基或牛粪培养基，叫做菌种过桥料，可防止麦粒散动、有利于快速萌发定植、阻止杂菌和麦粒接触，减少杂菌污染。培养料装好瓶后，要把瓶口、瓶内外壁，用清水洗干净。
六、瓶口塞棉塞
培养基装好瓶，待瓶口水干后，塞上棉塞，棉塞塞入瓶口长度为3厘米左右，松紧度以手提棉塞菌种瓶不脱落为准。
七、培养基灭菌
为了灭菌彻底，原种灭菌采用高压灭菌锅进行灭菌，当高压灭菌锅压力达到2.1公斤，温度为124—126℃时，保持2—2.5小时，高压灭菌锅的操作参照按照高压灭菌锅的说明书操作。
八、培养基冷却
培养基灭菌后，把培养基移入冷却室进行冷却，冷却室要求干净卫生，经常消毒，冷却过程中要防止二次污染。培养基冷却至28℃以下时就可以开始接种。
八、接种
接种要在接种箱、无菌操作工作台、无菌室内进行，按无菌操作规程进行操作，具体要求同母种接种。
九、贴标签和菌丝体培养
接种后要及时贴上标签，写明菌号和接种日期。原种菌丝体培养要放在专门的菌种培养室内，培养室要经常消毒，保持卫生，培养温度为22—24℃，每天通风15分钟，空气相对湿度控制在75%以下。
十、杂菌检查和质量鉴定
原种培养基过程中要定期检查杂菌污染情况，及时剔除杂菌污染的菌种瓶，菌种长满菌种瓶后，要对原种进行质量鉴定，剔除菌丝生活力弱的菌种。
（第四节）双孢蘑菇栽培种的生产
栽培种又叫三级种，由原种扩大繁殖而来，目的是解决双孢蘑菇生产大量的菌种需求。
一、生产工艺流程
和原种生产相同。
二、原种准备
根据栽培种生产的数量，提前准备好原种，一般一瓶原种可扩大繁殖40—50瓶栽培种。
三、培养基配方
和原种生产的培养基基本相同，但目前基本不用粪草培养基来生产栽培种。
四、培养基制作、装瓶（袋）、塞棉塞等
和原种生产相同。
五、培养基灭菌
培养基灭菌和原种培养基灭菌相同，还可以利用平压灭菌灶来灭菌，平压灭菌灶灭菌方法是：温度达到100℃时保持10小时以上，然后焖一夜。但麦粒培养基不采用常压灭菌的方法灭菌。
六、培养基冷却
培养基冷却和原种相同。
七、接种
接种要求和方法与原种一样，只不过栽培种接入的是原种。
八、贴标签和菌丝体培养
和原种要求相同。
九、杂菌检查和质量鉴定
和原种要求相同。
（第五节）双孢蘑菇菌种的保藏
双孢蘑菇菌种常常出现退化现象，主要是原来的优良性状丧失，出现生活率、产量、质量等下降的现象，菌种保藏的目的就是使菌种的退化降低到最小水平，使菌种在较长期的保藏后仍然保持原有的生活力、优良的性能、原有的形态特征，不污染杂菌和害虫。
菌种的变异速度和和其新陈代谢活动速度关联，菌种保藏的原理是：通过低温、干燥、隔绝空气和隔绝营养等手段，以达到最大限度地降低菌种的新陈代谢强度，抑制菌丝的生长繁殖。
常用的菌种保藏方法有：
一、PDA培养基斜面试管冰箱保藏法
这是双孢蘑菇菌种的一种短期保藏方法，一般用PDA培养基，当双孢蘑菇菌丝长满试管后，挑取没有污染的试管，棉塞用硫酸纸包扎后放置到4℃的冰箱中保藏，一般2—3个月转管一次。
二、粪草培养基试管冰箱保藏法
用粪草培养基装入试管，经高压灭菌后，接入菌种，菌丝长满管后，挑取菌丝生长正常无污染的试管，棉花塞用硫酸纸包扎后放入2—4℃的冰箱中保藏，一般2—3年转管一次。
三、液体石蜡保藏法
液体石蜡可防止培养基水分蒸发，隔绝菌丝与空气接触，抑制菌丝的新陈代谢，尽可能使菌丝处在休眠状态，延长菌丝的保藏期，一般可保藏5—7年，是一种中长期的菌种保藏法。方法是将经过灭菌除水的液体石蜡用无菌吸管吸到长满菌丝的试管斜面上，液体石蜡要高出斜面尖端1厘米左右，然后用无毒泡沫试管塞塞好，放在室温中保藏。
四、滤纸保藏法
采用孢子分离法收集孢子，将蘑菇孢子吸附在滤纸上，然后用无菌镊子将滤纸在无菌操作条件下移入无菌试管中，再将试管放在抽真空的干燥器中3—4小时，除去滤纸片中的水分，使之充分干燥，随后把试管口封好，放在冰箱中保藏。
五、真空冷冻干燥保藏法
简称冻干法，就是利用先把双孢蘑菇孢子速冻，然后在真空条件下使孢子升华而排出水分，孢子处于休眠状态，是一种长期保藏蘑菇孢子的方法。经冻干处理和检查合格后的孢子瓶，放到2—8℃的冰箱中保藏，一般可保藏8—10年。
六、液氮超低温保藏法
此种方法是把菌种装入冷冻保护剂的瓶内，将该瓶放入液氮（—196℃）中进行保藏，由于菌丝体处于—196℃，其新陈代谢降低到完全停止的状态，所以不需定期移植。经大量试验证明用液氮保种是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。
（第六节）双孢蘑菇菌种的质量标准
一、双孢蘑菇菌种质量标准
1、母种：在同一培养基上具有原菌株的菌落形态特征，无病虫害杂菌，菌丝洁白，生长健壮有力，边缘整齐，不发黄，不老化，刚长满试管斜面后使用。
2、原种：菌丝洁白粗壮浓密，均匀布满瓶周，外观颜色一致，无不均匀斑，培养基转为淡棕黄色，有蘑菇特有香味，菌丝不萎缩，不发黄，无感染病虫杂菌，生活力强，40—50天长满瓶，在长满瓶后10天左右使用。
3、栽培种：菌丝洁白、玉米黄，粗壮有力，均匀布满瓶周，外观颜色大体一致，无明显不均匀斑，培养基成淡棕黄色，有蘑菇特有的香味，无污染病虫和杂菌，培养基不萎缩，不吐黄水，30—45天长满瓶，菌丝长满瓶后15天使用。
